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介绍息争释实验室仪器的事情原理、操作步骤、维护调养、技术规范、应用案例等内容
麦角硫因(ergothioneine，EGT)作为一种天然手性氨基酸衍太阳成，存在硫醇和硫酮两种互变异构形式。研究讲明EGT可抑制脂质过氧化损伤，清除羟自由基(·OH)、超氧化物和单线态氧(1O2)等多种活性氧(ROS)物质，是优异的皮肤光敏掩护剂。通过紫外线照射光敏剂罗丹明B(RhB)溶液诱发包罗1O2在内的自由基体系(简称UV-RhB体系)，模拟紫外线照射人体皮肤发生ROS的情况，研究EGT在此体系下的抗氧化性能及其稳定性，以期为EGT应用于抗衰护肤品的开发提供理论依据。
实验要领
1. UV-RhB体系中EGT和VC抗氧化性能的测定
以pH 7.2的磷酸盐缓冲液(PBS，取2.2 g Na2HPO4，0.3 g NaH2PO4和8.5 g NaCl，加水溶解至1000 ml)为溶剂，划分配制0.001 %罗丹明B溶液(RhB)、0~1.00 mg/ml的EGT溶液及维生素C(VC)溶液。按表1配制测定溶液体系I、II，置紫外光(波长254 nm，光强度5 mW/cm2)下照射。划分于0，1 h时，接纳酶标仪，测定555 nm波优点吸收值(A0和A1)，每个样品平行3份，盘算0 h和1 h吸光度变化量的平均值(ΔA)，以ΔA空白为基线，按下式盘算体系中活性物质的抗氧化性能(F)。F(%)= (ΔA空白-ΔA样品)/ ΔA空白×100 ΔA空白式中，ΔA空白：空白对照溶液的吸收值的变化量(A0空白-A1空白);ΔA样品：样品溶液的吸收值的变化量(A0样品-A1样品)。
2.离子强度对EGT抗氧化性能的影响
按表1配制测定溶液体系III，EGT溶液浓度为0.25 mg/ml，以EGT浓度为0的体系作为空白对照，划分加入NaCl浓度划分为0 %，0.40 %，0.85 %，1.30 %，1.75 %的PBS。按2.1项下要领平行测定3份，取其平均值，盘算差异离子强度体系的ΔA和F值。
3.pH值对EGT抗氧化性能的影响?????
按表1配制测定溶液体系IV，EGT溶液浓度为0.25 mg/ml，以EGT浓度为0的体系作为空白对照，用0.1 mol/L HCl溶液和0.1 mol/L NaOH溶液划分调治PBS缓冲液pH值为3.0，5.0，7.2，9.0，11.0。按1项下要领平行测定3份，取其平均值，盘算差异pH体系的ΔA和F值。
4.还原剂对EGT抗氧化性能的影响
按表1配制测定溶液体系V，EGT溶液浓度为0.25 mg/ml，并以EGT浓度为0的体系作为空白对照，Na2SO3溶液以PBS缓冲液为溶剂，浓度划分为0 %，0.02 %，0.05 %，0.10 %，0.25 %，0.50 %。按1项下要领平行测定3份，取其平均值，盘算差异还原剂浓度体系的ΔA和F值。
5.金属离子对EGT抗氧化性能的影响
按表1配制测定溶液体系VI，其中溶剂为生理盐水，EGT溶液浓度为0.25 mg/ml，并以EGT浓度为0的体系作为空白对照。划分加入0.05 mol/L的K+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Fe3+生理盐水溶液。按1项下要领平行测定3份，取其平均值，盘算差异金属离子体系的ΔA和F值。
6.EDTA对EGT抗氧化性能的影响
按表1配制测定溶液体系VII，其中溶剂为生理盐水，EGT溶液浓度为0.25 mg/ml，并以EGT浓度为0的体系作为空白对照。划分加入0.10 mol/L的Fe3+溶液和0 %，0.02 %，0.04 %，0.10 %，0.20 %的EDTA溶液。按1项下要领平行测定3份，取其平均值，盘算差异EDTA浓度体系的ΔA和F值。
实验结果
1.EGT和VC的抗氧化量效关系
差异浓度EGT和VC的抗氧化性能见图1。由图1可见，0~1 mg/ml规模内，EGT和VC的F值随浓度的升高而增大，且相同浓度下EGT的F值一直高于VC，讲明EGT和VC抗氧化作用具有较好的量效关系，同时在此体系下EGT的抗氧化性能优于VC。
2.离子强度对EGT抗氧化性能的影响
离子强度对EGT抗氧化性能的影响见图2。由图2可见，NaCl浓度在0 %~0.85 %规模内，EGT的F值较为稳定，当NaCl浓度高于0.85 %时，F值急剧下降，讲明此时EGT抗氧化性能受到体系内高离子强度的抑制而显著降低。
3.pH值对EGT抗氧化性能的影响
pH值对EGT抗氧化性能的影响见图3。由图3可见，在pH 5~9规模内EGT的F值变化相对较�。裁鱁GT抗氧化活性在pH 5~9规模内较为稳定。
4.还原剂对EGT抗氧化性能的影响
还原剂亚硫酸钠对EGT抗氧化性能的影响见图4。由图4可见，随着亚硫酸钠浓度的增大，F值呈下降趋势，讲明在此体系中加入亚硫酸钠可抑制EGT的抗氧化活性。亚硫酸钠浓度大于0.1 %时，F值趋于稳定，讲明其抑制作用趋于平缓。
5.金属离子对EGT抗氧化性能的影响
差异金属离子对UV-RhB体系的影响见图5A。结果显示，与Na+体系相比，K+、Mg2+、Zn2+体系中ΔA空白变化较�。裁骷尤胝�3种离子对体系内RhB的降解速率影响较小;Cu2+对RhB的降解速率有较明显的抑制，而加入Fe3+后，体系中RhB降解速率显著提高，分析原因为Fe3+在水中形成Fe(OH)2+，经光照射生成Fe2+和羟自由基，增大了体系内自由基的浓度，进一步加剧了RhB的降解。
差异金属离子对EGT抗氧化性能的影响见图5B。结果显示，与Na+体系相比，Zn2+对EGT抗氧化性能没有明显影响，K+、Mg2+对EGT的抗氧化作用有一定水平的抑制，Cu2+在抑制RhB降解的同时对EGT的抗氧化性能也有较为明显的抑制作用。而在体系中加入Fe3+，RhB降解速率提高的同时，EGT的抗氧化性能也获得了明显的提升，这也讲明EGT可有效抑制Fe3+诱发的氧化应激反映。
6.EDTA对EGT抗氧化性能的影响
EDTA对EGT抗氧化性能的影响见图6。由图6可见，在添加Fe3+的体系中，EGT抗氧化性能随EDTA的浓度增加而减�。治鲈蛭狤DTA与Fe3+形成金属络合物后降低了体系内Fe3+的浓度，削弱了Fe3+对UV-RhB体系和EGT抗氧化性能的影响。
本文通过建设紫外辐射光敏剂诱发自由基体系，测定抗氧化活性物质的抗氧化性能。在此体系下EGT体现出优异的抗氧化性能，且在低离子强度和pH 5~9规模内具有良好的稳定性。
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